求 Balb/c小鼠IL-1β的PCR引物，我查阅好多文献各种说法不一，不知道怎么设计，请各路大侠帮忙指点一下！

作者：佚名更新日期：2025-06-18

1、一般是通过设计软件，例如oligo6，primer5等，你可以在网上搜一下引物设计软件下载和使用说明，是比较容易的。我一般用DANMAN设计引物，这个软件操作简单，占用资源也小。
至于设计引物的一般原则如下：
* 序列选取应在基因的保守区段
* 避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对，避免引物自身形成环状发卡结构
* 典型的引物18到24个核苷长。引物需要足够长，保证序列独特性，并降低序列存在于非目的序列位点的可能性。但是长度大于24核苷的引物并不意味着更高的特异性。较长的序列可能会与错误配对序列杂交，降低了特异性，而且比短序列杂交慢，从而降低了产量。
* Tm值在55－65℃（因为60℃核酸外切酶活性最高），GC含量在40%－60%
* 引物之间的TM相差避免超过2℃
* 引物的3’端避免使用碱基A，引物的3’端避免出现3个或3个以上连续相同的碱基
* 为避免的扩增，引物设计最好能跨两个外显子。
* Taqman探针PCR要求片段长度在80bp－150bp
* 引物末端（最后5个核苷酸）不能有超过2个的G和C。

2、至于你的基因的全序列可以再NCBI中找到。
希望对你有所帮助！

我帮你在NCBI查到IL-1β的基因登录号了“NM_008361”。
你把这个登录号输入到“Primer premier”软件中，根据你的要求修改设置就可以设计出引物了。

5'-ATA AGCCCACTCTACACCT3'；5'-ATTGGCCCTGAAAGGAGAGA-3'

求小鼠 Balb/c小鼠IL-8的PCR引物，我查阅了好多文献都么有找到，请各路大侠帮忙指点一下。灰常感谢！~

这个找不到你就自己设计吧~
去NCBI上，查找该基因，物种分类小鼠，然后找到该基因的mRNA，拉出它的CDS，在它前后设计引物即可。记得BLAST

1. 楼上说的都很有道理。不同的Taq确实效果很不一样。在我所使用过的几十种酶中，发现凡是遇到困难的模板，Qiagen 的HOTSTART MASTER MIX PLUS一般都可以得到产物，所以我强烈推荐（可以试试配合Q SOLUTION一起使用，一般免费索取）
2. 另外就是，你的目标基因的表达量是不是很低？你的PCR目的是什么？建议先找一个表达丰度高的体系，验证一下你的引物是否工作。对于极低表达丰度的目标，一轮PCR很有可能得不到产物，这是建议使用NESTED PCR，就是设计2套嵌套的引物，第一轮先用外面的那对，理论上可以得到一个比较大的产物（跑胶不一定能看到），然后稀释PCR产物50倍，再用里面那对引物扩一次，一般可以得到跑胶看得见的产物量。
3. 关于引物设计，推荐使用Primer3 plus，这是免费的网上设计软件，很好用。比你用的那2种引用次数多很多。你Google一下就可以了。